栗子屬殼斗科栗屬干果綠色植物，在全世界范疇內(nèi)被當(dāng)作主要的糧食作物之一。栗子生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)中形成很多的板栗殼仍以點燃和當(dāng)然爛掉等方法解決，那樣既導(dǎo)致了資源消耗也不利環(huán)境保護(hù)。據(jù)材料表明，板栗殼中帶有黑色素、有機(jī)物、多酚類化合物、含糖量(或苷類)和鞣質(zhì)等成分。板栗殼的多酚類物質(zhì)關(guān)鍵成分為單寧酸，而單寧酸的類型包含許多，在其中具備抗氧化性活力構(gòu)造的主要成分為鞣花單寧酸和花青素。人體內(nèi)的氧自由基產(chǎn)能過剩會導(dǎo)致各種病癥，包含心腦血管疾病、白內(nèi)障、阿爾茨海默氏癥等，可是身體的內(nèi)源抗氧化性化學(xué)物質(zhì)不能防御力體細(xì)胞損害，因此從食材資源中找尋純天然抗氧劑已成為了探究網(wǎng)絡(luò)熱點。有研究表明板栗殼花青素具備抵擋氧自由基、抗菌滅菌等功效，能夠普遍使用于食品類及調(diào)味品行業(yè)。丁培峰科學(xué)研究了茶氨酸在生抽中的防腐蝕實際效果，數(shù)據(jù)顯示，茶氨酸與納他霉素混配應(yīng)用后與山梨酸鉀具備等同于的防腐蝕實際效果，且安全系數(shù)大大的提高。與此同時，茶氨酸具備一定的養(yǎng)生作用，可提升生抽的食用價值和養(yǎng)生作用。

多酚類物質(zhì)盡管有著多種多樣生理學(xué)活力和增加調(diào)味料保存期的實際效果，可是外部標(biāo)準(zhǔn)也會干擾其可靠性，進(jìn)而減少它的身理活力，且身體中的胃酸及腸胃消化酶也會對花青素的活力造成危害。比如，獲取自姜黃地下莖的多酚類姜黃素的藥用價值普遍，毒副作用小，而且一直以來做為調(diào)味料和食用添加劑在世界各國廣泛運(yùn)用，可是，因為其溶出度低明顯影響到其使用使用價值?，F(xiàn)階段對板栗殼花青素的分析關(guān)鍵在抗氧化及獲取提升等層面，對其做為調(diào)味料多功能性添加物的研發(fā)及其其在人體內(nèi)中的消化科學(xué)研究較少。因而，本試驗研究危害板栗殼粗提物中花青素可靠性的要素，運(yùn)用HPLC-MS科學(xué)研究其類型并完成構(gòu)造表現(xiàn)，與此同時根據(jù)身體身體之外消化吸收實體模型科學(xué)研究其消化吸收狀況，為板栗殼中純天然抗氧劑的研發(fā)以及在食品類和調(diào)味料層面的使用給予一定的參照根據(jù)。

一、原材料與方式

1、原材料與實驗試劑

栗子：源自山東省祁蒙山。

香草醛、α-胃蛋白酶、膽液提取液、蛋白酶、胃蛋白酶：國藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)表兒茶素、沒食子酸、表兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶酸、沒食子兒茶酸沒食子酸酯及其表沒食子兒茶酸沒食子酸酯：上海市阿拉丁生物化學(xué)科技發(fā)展有限責(zé)任公司。

2、儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

TG16-WS離心脫水機(jī)長沙市湘智離心脫水機(jī)儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；UV-1800紫外線能見光光度計上海美鼎慧儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；pH計梅特勒-托利多儀器設(shè)備(上海市)有限責(zé)任公司；Agilent1100LC-MSD/TOF高辨別高效液相質(zhì)譜分析液質(zhì)儀英國安捷倫科技企業(yè)。

3、實驗方式

（1）板栗殼粗提物獲取制取

將板栗殼清洗晾曬，破碎過40目篩獲得板栗殼粉末狀。參照蘇彩霞等科學(xué)研究取得的較佳獲取加工工藝，加入適量板栗殼粉末狀添加70%酒精溶液，使料液之比1∶15(g/mL)，在65℃的標(biāo)準(zhǔn)下獲取90min，再將萃取液開展真空過濾，滲瀝液在40℃下真空泵濃縮，再度低溫干燥，超低溫儲存預(yù)留。

（2）板栗殼粗提物中花青素可靠性影響因素科學(xué)研究

①板栗殼花青素水溶液的制取

稱量板栗殼粗提物0.1g，用純凈水滴定劑至100mL，科學(xué)研究陽光照射、溫度、金屬離子和pH對花青素的危害。

②陽光照射對板栗殼花青素的危害

取10mL板栗殼花青素水溶液3份，各自放置室內(nèi)溫度陽光照射、室內(nèi)溫度遮光和超低溫遮光的標(biāo)準(zhǔn)下，置放4d，每過1d抽樣測量試品水溶液中花青素成分(以保存率表明)；花青素保存率=試品待比測花青素成分/試品原始花青素成分×100%?；ㄇ嗨氐臏y定法選用鹽酸-香草醛酶活性測定。

③溫度對板栗殼花青素的危害

取10mL板栗殼花青素水溶液6份，各自在40，50，60，70，80，90℃標(biāo)準(zhǔn)下恒溫水浴槽2h，花青素成分測定法跟上面一樣。

④pH對板栗殼花青素的危害

取10mL板栗殼花青素水溶液14份，用HCl和NaOH水溶液配置成pH為1～14的水溶液，將花青素試品與10mLpH為1～14的水溶液混和，密封性靜放6h，花青素成分測定法跟上面一樣。

⑤金屬離子對板栗殼花青素的危害

配置0.02mol/L含F(xiàn)e³ 、Fe² 、Ba² 等金屬離子的水溶液備用，再把不一樣金屬離子水溶液與花青素水溶液等容積混和，密封性置放一段時間，觀查水溶液色調(diào)轉(zhuǎn)變。

（3）板栗殼花青素結(jié)構(gòu)特征

用高效液相色譜測量沒食子酸、沒食子兒茶酸、表兒茶素、沒食子兒茶酸沒食子酸酯、表沒食子兒茶酸沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯6種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及板栗殼粗提物出峰時間，較為得到板栗殼粗提物中常含化學(xué)物質(zhì)，并對粗提物開展高分辨質(zhì)譜結(jié)構(gòu)特征。

色譜儀標(biāo)準(zhǔn)：離子交換柱為DIONEXC₁₈(4.6mm×250mm，5μm)，流動性相：工業(yè)甲醇(B)(摩爾分?jǐn)?shù)為0.05%)-三氟乙酸(A)，梯度方向過柱：0～12min，A：87%～75%，B：13%～20%；12～23min，A：75%～20%，B：25%～80%；23～26min，A：87%，B：13%。流動速度：0.5mL/min；檢驗光波長：280nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。

質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)：離子交換柱為LichrosphersC₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；質(zhì)譜分析氣相分離之比1∶1；空氣負(fù)離子方式；離子化方法：ESI；掃描儀范疇：m/z50～2000；干躁氣溫度：350℃；干躁氣流動速度：15L/min；噴霧器工作壓力：40psi；毛細(xì)血管工作電壓：3500V。

（4）板栗殼花青素的消化

①消化吸收管理體系的制取

胃酸自然環(huán)境配置：在250mL量杯中添加0.4g的胃蛋白酶、9mg/mL的氯化鈉溶液90mL攪拌，再轉(zhuǎn)到100mL的容量瓶中，用1mol/L硫酸調(diào)整使水溶液pH為2～2.3，直到水溶液至容量瓶標(biāo)尺線。

腸胃自然環(huán)境配置：在250mL量杯中添加225mg的蛋白酶、225mg的膽液提取液、9mg/mL的氯化鈉溶液90mL攪拌，再轉(zhuǎn)到100mL的容量瓶中，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整使水溶液pH為7～7.2，直到水溶液至容量瓶標(biāo)尺線。

②仿真模擬胃酸消化吸收

設(shè)定5組平行面實驗和一個空白試驗，每一組平行面試驗標(biāo)準(zhǔn)以下：在50mL錐形瓶中先后添加中口腔內(nèi)部消化酶4mL、胃消化酶16mL，于37℃、轉(zhuǎn)速比為250r/min的搖床中波動反映2h，每0.5h測1次pH值，根據(jù)測pH的轉(zhuǎn)變可分析判斷花青素是不是消化吸收；并在反應(yīng)速度為0.5，1，1.5，2h各取1mL消化酶，測量花青素的成分，并估算其吸收率；吸收率=(1-測得花青素品質(zhì)/最初添加花青素品質(zhì))×100%。

③仿真模擬腸胃消化吸收

設(shè)定5組平行面實驗和一個空白試驗，每一組平行面試驗標(biāo)準(zhǔn)以下：量取胃酸消化酶20mL，用氫氧化鈉溶液中合到pH為7，停止胃酸消化吸收反映；再添加20mL腸胃消化酶反映2h，并在反應(yīng)速度0.5，1，1.5，2h各取1mL消化酶測量花青素的成分，并估算其吸收率。