按照甜葉菊廢渣提取物的主要成分為咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素和槲皮苷。采用HPLC法對(duì)兩種甜葉菊廢渣提取物中的主要成分進(jìn)行定量分析。高效液相色譜條件為:AgilentEclipsePlusC18色譜柱(50mm×2.1mm,1.8μm),流動(dòng)相為0.1%甲酸(A)和甲醇(B),流速0.1mL/min。洗脫程序:0~10min,10%~50%(B);10~12min,50%~10%(B);12~15min,10%(B)。檢測(cè)波長(zhǎng)320nm和360nm,柱溫30℃,進(jìn)樣量1μL。采用咖啡酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、槲皮素和槲皮苷為標(biāo)準(zhǔn)品,按上述色譜條件分別測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線,并測(cè)定兩種甜葉菊廢渣提取物中各主要成分的含量,通過與標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間相比較,從甜葉菊廢渣提取物中分離并檢測(cè)到了6種酚酸(320nm)和2種黃酮(360nm),如圖1所示。采用外標(biāo)法對(duì)上述8種主要成分含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。樣品1中總酚酸的含量為(472.01±2.28)mg/g,總黃酮的含量為(75.27±1.37)mg/g,其中含量最高的3種成分依次為異綠原酸C(158.91±1.00)mg/g、異綠原酸B(116.39±0.57)mg/g和咖啡酸(105.67±0.37)mg/g。樣品2中總酚酸的含量為(424.41±5.01)mg/g,總黃酮的含量為(46.4±2.36)mg/g,其中含量最高的3種成分依次為咖啡酸(146.47±1.68)mg/g、異綠原酸C(88.73±1.05)mg/g和異綠原酸B(67.38±0.82)mg/g。從結(jié)果中看出,兩種甜葉菊廢渣提取物都富含酚酸和黃酮類化合物,其中,樣品1中酚酸和黃酮類化合物的總量均大于樣品2,且兩種樣品各組成成分含量之間也存在差異,樣品1綠原酸類化合物含量較多,樣品2咖啡酸含量較多。這些成分具有多種生物活性,如清除自由基,抗氧化,抗炎癥,抗衰老等。因此對(duì)甜葉菊廢渣提取物進(jìn)行研究,可為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。
由圖2可知,D-半乳糖組小鼠的血清SOD和GPx活力明顯低于正常組(P<0.05),MDA含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05),表明經(jīng)D-半乳糖誘導(dǎo),小鼠血清內(nèi)的抗氧化活性下降,脂質(zhì)過氧化物明顯增多。兩種甜葉菊廢渣提取物低劑量組小鼠血清SOD和GPx活力,MDA含量與D-半乳糖組相比均無顯著性差異(P>0.05);兩種甜葉菊廢渣提取物的中劑量組小鼠血清GPx活力較D-半乳糖組分別顯著增加了16.39%和11.88%(P<0.05),而小鼠血清SOD活力和MDA含量與D-半乳糖組相比均無顯著性差異(P>0.05);兩種甜葉菊廢渣提取物高劑量組能夠使D-半乳糖處理的小鼠血清SOD和GPx活力升高,MDA含量降低,其中樣品1高劑量組SOD和GPx活力分別顯著增加10.32%和21.67%(P<0.05),MDA含量降低了24.5%(P<0.05),樣品2高劑量組SOD和GPx活力分別顯著增加11.28%和17.42%,MDA含量降低了24.8%(P<0.05)。兩種甜葉菊廢渣提取物之間相比,對(duì)D-半乳糖處理小鼠血清抗氧化指標(biāo)(SOD,GPx和MDA)的影響無顯著性差異(P>0.05)。綜合以上結(jié)果表明,兩種甜葉菊廢渣提取物有助于D半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠清除血清脂質(zhì)過氧化物,提高血清抗氧化酶活力,增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的能力。
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