元素形態(tài)分析的樣品前處理不同于傳統(tǒng)的總量分析，在前處理方法上需要保持元素的現(xiàn)有形態(tài)，因此也不能沿用傳統(tǒng)的用于總量分析的酸消解方法和灰化法。元素形態(tài)分析的樣品前處理一般分以下幾個(gè)步驟：

① 樣品制備及試樣的儲(chǔ)存；

② 目標(biāo)分析物的選擇性提??；

③ 必要時(shí)，形態(tài)分離前的衍生化。

1. 富硒大蒜中硒的形態(tài)分析（γ-Glu-MeSeCys、MeSeCys、SeMet、Se(VI)）

（1）水溶液萃取

精確稱取干燥的大蒜樣品0.2g于帶有塞子的聚乙烯瓶中，加入10mL鹽酸羥胺溶液。新鮮的大蒜撥皮，稱取大約20g蒜瓣，直接加入200mL同樣的溶液，均一化樣品。樣品放入37℃水浴中，磁力攪拌1小時(shí)。離心后過濾。

（2）酶萃取

精確稱取0.2g干燥的大蒜樣品于帶有塞子的玻璃管中，加入10mL水和20mg蛋白酶，在37℃條件下磁力攪拌24小時(shí)。樣品離心后經(jīng)0.45μm濾膜過濾。

注：酶萃取效率幾乎是100%，水溶液萃取的應(yīng)用主要是查找易發(fā)生變化的selenoamino acids。

2. 天然蘑菇與富硒蘑菇中硒的形態(tài)分析(SeMet和未知硒形態(tài))

(1) 水萃?。?7℃或85℃）：

精確稱取0.2g凍干樣品，加入5mL Milli-Q水，樣品置于浸沒式數(shù)字控制自動(dòng)調(diào)溫器中，在相應(yīng)溫度下加熱1h。

(2) 蛋白酶水解

精確稱取0.2g凍干的蘑菇樣品，加入20mg蛋白酶和5g Milli-Q水，在37℃條件下反應(yīng)16h。萃取完后，離心，經(jīng)0.45μm的濾膜過濾。

注：天然蘑菇采用水萃取程序和蛋白酶水解程序，萃取效率相差不多。富硒蘑菇采用蛋白酶水解程序，萃取效率比水萃取程序高。

3. 牡蠣組織樣品中硒的形態(tài)分析(Se(IV)、SeCys2、TMSe+、SeMet、Se(VI))

稱取0.25g凍干的牡蠣組織樣品，加入10%(w/w)非特征性枯草桿菌蛋白酶，在pH 7.50，37℃條件下，反應(yīng)24h，重復(fù)上述步驟2次，合并反應(yīng)液，經(jīng)10kDa定點(diǎn)過濾器超過濾。

4. 環(huán)境樣品中硒的形態(tài)分析（有機(jī)硒）

以甲醇/水(1：1，v/v)或甲醇/水(1：1，v/v)-0.28mol/L HCl或甲醇/水(1：1，v/v)-4%NH3.H2O為提取液，置于盛有一定量試樣的刻度管中，超聲30min后離心，收集上層清液，重復(fù)上述過程1次，合并上清液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，調(diào)節(jié)pH為7.0左右后測(cè)定。

對(duì)于非固體環(huán)境樣品，如尿樣，用水精確稀釋（1+4）后直接測(cè)定。

5. 沉積物中硒的形態(tài)分析（Se(IV)、Se(VI)）

精確稱取一定量樣品于聚苯乙烯離心管中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液，超聲4h，離心，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，調(diào)節(jié)pH為7.0左右后測(cè)定。

6.亞硒酵母片中硒的形態(tài)分析（SeCys、Se(IV)、SeMet、SeMeCys）

精確稱取1.0g樣品于50mL離心管中，加入25mL去離子水，離心管放于沸水浴中加熱1h，混合物每15min搖勻1次，萃取完畢，樣品離心，經(jīng)0.22μm尼龍過濾器過濾。

7. 發(fā)酵粉和米粉中硒的形態(tài)分析(SeCys、SeMet、SeMeCys、Se(IV)、Se(VI))

精確稱取0.4g米粉，加入40mg蛋白酶，20mg脂肪酶和5g Milli-Q水，在37℃條件下反應(yīng)16h。水解后的樣品離心（4000g,45min,15℃），過濾。對(duì)于發(fā)酵粉，樣品量和各種酶的用量都減半。

8.尿樣中硒的形態(tài)分析（SeCys、Se(IV)、SeMet、SeMeCys）

精確量取10mL尿樣，加入2mL 3%乙酸，搖5min，用去離子水稀釋至25mL。樣品離心后經(jīng)0.22μm尼龍過濾器過濾。

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