④抽抽用的乙醚或石油醚要求無(wú)水、無(wú)醇、無(wú)過氧化物，揮發(fā)殘?jiān)康汀Ｒ蛩痛伎蓪?dǎo)致水溶性物質(zhì)溶解，如水溶性鹽類、糖類等，使得測(cè)定結(jié)果偏高。過氧化物會(huì)導(dǎo)致脂肪氧化，在烘干時(shí)也有引起爆炸的危險(xiǎn)。

⑤如果沒有無(wú)水乙醚可以自己制備，制備方法如下：在100mL乙醚中，加入無(wú)水石膏50g，振搖數(shù)次，靜置10h以上，蒸餾，收集35ºC以下的蒸餾液，即可應(yīng)用。

⑥乙醚中過氧化物的檢查方法：取10mL乙醚，加2mL10%的碘化鉀溶液，用力振搖，放置1min，若出現(xiàn)黃色，則證明有過氧化物存在。

⑦乙醚的處理：在乙醚中加入1/20～1/10體積的硫代硫酸鈉溶液(200g/L)洗滌，再用水洗，然后加入少量無(wú)水氯化鈣或無(wú)水硫酸鈉脫水，于水浴上蒸餾，蒸餾溫度略高于溶劑沸點(diǎn)，能達(dá)到燒瓶?jī)?nèi)沸騰即可。棄去最初和最后的1/10餾出液，收集中間餾出液備用。

⑧提取時(shí)水浴溫度不可過高，以從冷凝管滴下80滴/min左右，回流6～12次/h為宜，提取過程應(yīng)注意防火。

⑨在抽提時(shí)，冷凝管上端最好連接一個(gè)氯化鈣干燥管，這樣，可防止空氣中水分進(jìn)入，也可乙醚揮發(fā)在空氣中，如無(wú)此裝置可塞一團(tuán)干燥的脫脂棉球。

⑩抽提是否完全，可憑經(jīng)驗(yàn)，也可用濾紙或毛玻璃檢查，將抽提管下口滴下的乙醚滴在濾紙或毛玻璃上，揮發(fā)后不留下油跡表明已抽提完全。

?在揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌用直接火加熱，應(yīng)該用電熱套、電水浴等。烘前應(yīng)驅(qū)除全部殘余的乙醚，因乙醚稍有殘留，放入烘箱時(shí)，有發(fā)生爆炸的危險(xiǎn)。另外，因?yàn)橐颐咽锹樽韯?，要注意室?nèi)通風(fēng)。

?反復(fù)加熱會(huì)因脂類氧化而增重。如質(zhì)量增加，以增重前的質(zhì)量作為恒重。

三、酸水解法

1、原理

樣品經(jīng)酸水解，使結(jié)合或包藏在組織里的脂肪游離出來(lái)，用乙醚提取脂肪，然后在沸水浴中回收和除去溶劑，稱重而獲得游離和結(jié)合的脂肪含量。

2、試劑

①鹽酸。

②乙醇(95％)。

③乙醚。

④石迪醚(30～60ºC沸程)。

3、儀器

①100mL具塞量筒。

②干燥器。

③恒溫水浴鍋。

4、操作方法

（1）固體樣品：

①固體樣品：精密稱取約2.00g，置于50mL大試管內(nèi)，加8mL水，混勻后再加10mL鹽酸。

②液體樣品：稱取10.00g，置于50mL大試管內(nèi)，加10mL鹽酸。

(2)樣品測(cè)定：將試管放入70～80℃水浴中，每隔5～10min以玻璃棒攪拌一次，至樣品消化完全為止。40～50min后，取出試管，加入10mL乙醇，混合。冷卻后將混合物移入100mL具塞量筒中，以25mL乙醚分次洗試管，一并倒入量筒中，待乙醚全部倒入量筒后，加塞振搖lmin，小心開塞，放出氣體，再塞好，靜置12min，小心開塞，并用石油醚-乙醚等量混合液沖洗塞及筒口附著的脂肪。靜置10～20min，待上部液體清晰，吸出上清液于已恒重的錐形瓶?jī)?nèi)，再加5mL乙醚于具塞量筒內(nèi)，振搖，靜置后，仍將上層乙醚吸出，放入原錐形瓶?jī)?nèi)。將錐形瓶置水浴上蒸干，置95～105℃烘箱中干燥2h，取出放干燥器內(nèi)冷卻0.5h后稱量，重復(fù)上述操作直至恒重。

5、計(jì)算

X=（m₁-m₀)*100 /m₂          

式中：X——樣品中脂肪的含量，g/100g；

m₁——錐形瓶和脂肪的質(zhì)量，g；

m₀——錐形瓶的質(zhì)量，g；

m₂——樣品的質(zhì)量，g；

6、說(shuō)明及注意事項(xiàng)

①本法為GB/T5009.6—2003《食品中脂肪的測(cè)定》第二法。本法適用于各類食品中脂肪的檢測(cè)，特別是加工后的混合食品及容易吸濕、結(jié)塊、不易烘干的食品，不能采用采用索氏抽提法時(shí)，用此法效果較好。

②魚類、貝類和蛋品中含有較多磷脂，與鹽酸一起加熱時(shí)，磷脂幾乎完全分解為脂肪酸和堿，導(dǎo)致測(cè)定值偏低，故本法不宜用于測(cè)定含有大量磷脂的食品。因糖類遇強(qiáng)酸容易炭化而影響測(cè)定結(jié)果，所以此法也不適用于含糖量高的食品。

③固體樣品必須充分磨細(xì)，液體樣品必須充分混勻，以便充分水解。避免因結(jié)合態(tài)脂肪不能完全水解，致使結(jié)果偏低，同時(shí)在提取時(shí)發(fā)生乳化現(xiàn)象。

④水解時(shí)應(yīng)防止大量水分損失，使酸濃度升高。

⑤水解后加入乙醇可使蛋白質(zhì)沉淀，降低表面張力，促進(jìn)脂肪球聚合，同時(shí)可溶解一些碳水化合物、有機(jī)酸等。用乙醚提取脂肪時(shí)，因乙醇可溶于乙醚，所以加入石油醚，來(lái)降低乙醇在乙醚中的溶解度，使乙醇溶解物留在水層，并使分層清晰。

⑥揮干溶劑后，殘留物中如有黑色焦油狀雜質(zhì)，是分解物與水混入所致，會(huì)使測(cè)定值增大，造成誤差，可用等量乙醚和石油醚溶解后過濾，再次進(jìn)行揮干溶劑的操作。

四、氯仿-甲醇提取法

1、原理

將試樣分散于氯仿-甲醇混合液中，氯仿、甲醇和試樣中的水形成三元抽提體系，可使試樣中包括結(jié)合態(tài)脂類在內(nèi)的全部脂類游離出來(lái)，提取后，經(jīng)過濾除去非脂成分，回收溶劑，殘留脂類用石油醚提取，除去溶劑后稱量即得脂肪含量。

2、試劑

①氯仿-甲醇混合液：按2:1的體積比混合(氯仿97％以上，甲醇96％以上)。

②石油醚。

③無(wú)水硫酸鈉：特級(jí)，在120～135ºC干燥1～2h。

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