3 結(jié)果與分析

3. 1 菌株生長曲線結(jié)果

如圖 1 所示，微生物固態(tài)發(fā)酵生長曲線整體呈增長-平穩(wěn)-下降趨勢。菌株生長對數(shù)期主要集中在 72～96 h。隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分含量減少，不能滿足菌株生長發(fā)育的需要，菌株數(shù)量不斷減少，生長曲線逐漸降低。發(fā)酵菌株中混合菌，在 72 h 菌株數(shù)量達(dá)到峰值，生長情況最好。干酪乳桿菌在 120～144 h 達(dá)到對數(shù)期，干酪乳桿菌較其他菌株生長對數(shù)期時(shí)間延后。

3. 2 粗蛋白含量結(jié)果

蛋白質(zhì)是動物新陳代謝、生長發(fā)育等生理活動必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)，是動物重要的營養(yǎng)源之一，對體組織、器官和細(xì)胞的形成、修補(bǔ)、增生以及酶類和激素功能的實(shí)現(xiàn)都是不可或缺的，其作用是其他營養(yǎng)物質(zhì)不可替代的。酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線 Y=0. 102 3x−0. 000 2，R2= 0. 999 5。如圖 2 所示，青蒿葉渣發(fā)酵后積累粗蛋白含量整體呈上升趨勢，青蒿葉渣發(fā)酵后與對照組比較，酵母菌發(fā)酵青蒿葉渣積累粗蛋白含量提高了 71. 15%（P<0. 05），提高程度最高，這可能與酵母菌含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和氨基酸等有關(guān)；其次是植物乳桿菌 B7，發(fā)酵后其粗蛋白含量提高了 58. 59%（P<0. 05）；瑞士乳桿菌發(fā)酵后其粗蛋白含量提高了 55. 45%（P<0. 05）。綜上，釀酒酵母菌適合應(yīng)用于發(fā)酵提高相關(guān)產(chǎn)品粗蛋白。 

3. 3 青蒿葉渣功效成分含量結(jié)果

雙氫青蒿酸和青蒿乙素標(biāo)準(zhǔn)品通過 GC-MS檢測得到色譜圖和質(zhì)譜圖，通過對 2 種功效成分定量分析，比較發(fā)酵后雙氫青蒿酸和青蒿乙素功效成分含量變化。

由圖 3 可見，青蒿葉渣經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵，雙氫青蒿酸和青蒿乙素含量顯著提高，整體呈上升趨勢。數(shù)據(jù)顯示，青蒿葉渣經(jīng)地衣芽孢桿菌發(fā)酵后與對照組比較，雙氫青蒿酸和青蒿乙素含量分別提高了 111. 74%（P<0. 05）和 71. 15%（P<0. 05）；其次是瑞士乳桿菌，發(fā)酵后其雙氫青蒿酸含量提高了 101. 93%（P<0. 05）；青蒿葉渣經(jīng)丁酸梭 菌 發(fā)酵后，其青蒿乙素含量提高了82. 67%（P<0. 05）。

3. 4 混合菌發(fā)酵

根據(jù)上述單一菌種固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣后粗蛋白、雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量變化結(jié)果，選擇酵母菌、植物乳桿菌及枯草芽孢桿菌組成混合菌，發(fā)酵青蒿葉渣。如圖 4、圖 5 所示，青蒿葉渣經(jīng)混合菌固態(tài)發(fā)酵后，粗蛋白含量提高了61. 73%（P<0. 05），雙氫青蒿酸含量提高了82. 76%（P<0. 05），青蒿乙素含量提高了69. 15%（P<0. 05）?；旌暇虘B(tài)發(fā)酵青蒿葉渣功效成分含量提升顯著，為探索青蒿葉渣作為動物飼料添加劑的開發(fā)產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

3. 5 飼喂試驗(yàn)結(jié)果分析

如圖 6 所示，青蒿葉渣混合菌發(fā)酵產(chǎn)物作為飼料添加劑飼喂羅曼灰雞群后，蛋殼的光澤度改善，亮度增加，顏色和蛋殼質(zhì)量改善不明顯（圖 6A），紅糞情況明顯好轉(zhuǎn)，糞便成型，變細(xì)膩，羅曼灰雞的腸毒過料效果明顯。

4 討論

中藥渣掩埋堆放不僅造成中藥資源浪費(fèi)，增加相關(guān)制藥企業(yè)支出，開發(fā)中藥渣綜合利用新技術(shù)，提升中藥渣利用率。本研究選取里氏木霉、地衣芽孢桿菌、黑曲霉菌、枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、瑞士乳桿菌、丁酸梭菌、植物乳桿菌 B7、酵母菌、畢赤酵母菌及復(fù)合菌株（釀酒酵母菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌）固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣，探索其作為動物飼料添加劑的可能。粗蛋白含量是飼料添加劑的一個(gè)重要評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，本研究 結(jié) 果 顯 示 酵 母 菌 固 態(tài) 發(fā) 酵 粗 蛋 白 含 量 提 高71. 15%（P<0. 05），提 高 最 大 ，適 合 用 于 發(fā) 酵生產(chǎn)。

發(fā)酵青蒿渣產(chǎn)品的蛋雞飼喂實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蛋殼亮度增加，雞群紅糞情況明顯好轉(zhuǎn)，糞便變得細(xì)膩，過料殘?jiān)黠@減少，推測與雙氫青蒿酸和青蒿乙素對雞腸道球蟲有明顯抑制作用，且益生菌分泌大量抑菌物質(zhì)，改善禽畜腸道內(nèi)環(huán)境有關(guān)。李姣清研究在雞的日料中按 1 g•kg-1體重添加中藥復(fù)方制劑到半天的飲水中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方制劑對小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)有積極影響，可以增加腸道菌群多樣性，有效地改善腸道健康和功能，促進(jìn)雛雞的生長。周翠珍等用常山、青蒿、苦參、柴胡、地 榆（炭）、白 頭 翁 等 組 成 的 純 中 藥 散 劑 ，按 照0. 25%、0. 5%、l%濃度給不同試驗(yàn)組雞混勻拌料飼喂，試驗(yàn)結(jié)果表明，l%純中藥散劑組 0. 5% 純中藥散劑組的抗球蟲指數(shù)在 160～180 之間，為中效， 2 個(gè)劑量均能很好的控制人工感染柔嫩艾美耳球蟲病雞免于死亡，改善禽畜過料病癥，保護(hù)腸道健康。所以青蒿葉渣采用微生物固態(tài)發(fā)酵模式，粗蛋白含量提高，殘留功效成分得到充分釋放，未來可作為動物養(yǎng)殖飼料添加劑。 

5 結(jié)論

本研究通過微生物固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣，發(fā)酵后粗蛋白、雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量均較對照組有所提高。青蒿葉渣經(jīng)釀酒酵母菌發(fā)酵后產(chǎn)物中粗蛋白含量最高，經(jīng)地衣芽孢桿菌發(fā)酵后產(chǎn)物中雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量最高?；旌暇虘B(tài)發(fā)酵青蒿葉渣使產(chǎn)物中功效成分含量得到較高提升，將其添加到動物飼料中飼喂雞群，紅糞情況明顯好轉(zhuǎn)，尚不能明確益生菌和青蒿功效成分對雞腸道保健的作用機(jī)制。如將青蒿添加到動物飼料目錄中，可使該研究結(jié)果為今后進(jìn)一步探索工廠化發(fā)酵生產(chǎn)青蒿動物飼料添加劑提供參考依據(jù)。

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