本實驗中,在多糖提取物不被顯著降解的條件下去除結合的蛋白質,以提高多糖的質量分數是十分必要的。1.3.1中得到的DAMP的多糖質量分數為(53±0.58)%,蛋白質質量分數為(39.09±0.88)%。經4種蛋白質脫除方式處理后,多糖質量分數、蛋白質脫除率和多糖損失率見表1。多糖質量分數由高到低分別為:TCA法>稀堿法>堿酶酶解法>GDL法。其中,TCA組多糖質量分數顯著高于其他3組。蛋白質脫除率及多糖損失率由高至低依次為:TCA法>稀堿法>堿酶法>GDL法。結合多糖質量分數、蛋白脫除率與多糖損失率分析可得,TCA法脫蛋白質最有效,但多糖損失嚴重;DAMP經稀堿法與酶解法處理后,多糖質量分數無顯著差別,但稀堿組蛋白質脫除率及多糖損失率顯著高于酶解組;經GDL法處理后,多糖質量分數及蛋白質脫除率均顯著低于其他方式,多糖損失率也最少。
由表2可知,堿酶組多糖含有Man、GlcN、GalUA、Glc、Gal、Am;稀堿組多糖含有GlcN、Glc、Gal;TCA組多糖含有GlcN、GalUA、Glc;GDL組多糖含有Man、GlcN、Rha、GalUA、Glc。不同蛋白質脫除方式所得多糖的單糖組成略有差別,稀堿組和堿酶組多糖中的半乳糖醛酸在堿性環(huán)境中生成半乳糖,而TCA法和GDL法多糖中檢測到半乳糖醛酸,未檢測到半乳糖。各組數據中,葡萄糖質量分數均最高。據報道,海灣扇貝多糖組分為中性多糖和酸性多糖,與本實驗結果一致。
為了明確不同脫除方式處理的扇貝多糖中殘留蛋白質的情況,以及這些蛋白質與抗氧化活性之間的關系,對4種方式脫蛋白后的干貝多糖進行了氨基酸組成分析,結果顯示:干貝多糖中的總氨基酸質量分數為15~160mg/g,堿酶組和稀堿組均檢測山16種氨基酸,TCA組和GDL組均檢測出14種氨基酸,可見氨基酸種類齊全。由表4可知,堿酶組的親水氨基酸及極性氨基酸質量分數較高,非極性氨基酸及必需氨基酸質量分數較低,疏水性氨基酸質量分數最低;稀堿組的疏水氨基酸質量分數較低,其他4種氨基酸質量分數均最低;TCA組的疏水性氨基酸、非極性氨基酸與必需氨基酸質量分數最高,親水性氨基酸與極性氨基酸質量分數較低;GDL組的親水性氨基酸和極性氨基酸質量分數最高,疏水性氨基酸、非極性氨基和必需氨基酸質量分數較高。
由圖1可知,在氫氧化鈉的濃度為0~0.1mol/L時,對照組(剛果紅)的最大吸收波長逐漸減小,GDL組和堿酶組多糖與剛果紅結合生成的絡合物的最大吸收波長隨NaOH濃度的增大紅移明顯發(fā)生,表明GDL組和堿酶組多糖存在三螺旋結構,TCA組和稀堿組多糖不具有三螺旋結構,可能是DAMP在堿液、酸液處理過程中,維持穩(wěn)定三螺旋結構作用的分子內、分子間氫鍵受到破壞,導致三螺旋結構變性。
相關鏈接:氨基酸,多糖,氫氧化鈉,半乳糖醛酸
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