每升黑木耳發(fā)酵液能提取多糖244mg,純度為85.3%,F(xiàn)T-IR光譜顯示,黑木耳胞外多糖為具有典型β-吡喃糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜多糖(圖1),官能團(tuán)分析表明,在3419cm-1處的寬峰是-OH伸縮振動(dòng)吸收峰,2973cm-1和2918cm-1處的弱吸收帶是-CH伸縮振動(dòng)吸收峰,1735cm-1和1638cm-1處的吸收峰表明含有糖醛酸,1383cm-1是-CH彎曲振動(dòng)吸收峰,1078cm-1和1048cm-1處的吸收峰是C-O-H和C-O-C中的C-O引起的振動(dòng)吸收;880cm-1是β-糖苷鍵的特征吸收峰。
黑木耳胞外多糖經(jīng)過(guò)酸水解和衍生化后,利用HPLC分析其單糖組成。結(jié)果顯示,葡萄糖和木糖為其主要的單糖組分(物質(zhì)的量比為53.85%和25.05%),還有少量的甘露糖、果糖、巖藻糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸(表1)。與紅外光譜分析結(jié)果一致,黑木耳胞外多糖是由多種單糖組分構(gòu)成的雜合多糖。
與對(duì)照組相比,灌胃黑木耳胞外多糖后小鼠體重?zé)o明顯變化(圖2)。臟器系數(shù)是反映動(dòng)物器官發(fā)育的重要指標(biāo),可直觀反映受試物對(duì)動(dòng)物存在的毒害作用。本研究通過(guò)稱量小鼠各臟器組織質(zhì)量,計(jì)算其臟器系數(shù)。黑木耳胞外多糖對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響見(jiàn)表2,統(tǒng)計(jì)分析顯示,樣品組與對(duì)照結(jié)果無(wú)顯著性差異(P>0.05)。上述試驗(yàn)表明,灌胃黑木耳胞外多糖不會(huì)引起小鼠臟器發(fā)生病理性異常。
本試驗(yàn)利用微生物16SrRNA基因測(cè)序技術(shù),探索了灌胃黑木耳胞外多糖小鼠腸道菌群的變化情況。測(cè)序所得原始數(shù)據(jù)經(jīng)篩選過(guò)濾后,對(duì)獲得的序列進(jìn)行可操作單元分析(OTU)歸并劃分,采用Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行注釋,通過(guò)多種多變量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析工具對(duì)不同樣本(組)微生物群落結(jié)構(gòu)差異進(jìn)行分析,得到了小鼠腸道微生物16SrRNA在屬水平OTU序列的相對(duì)豐度(圖3)。通過(guò)Metastats對(duì)樣本組間序列量差異的比較檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,擬桿菌屬和羅氏菌屬顯著增加(P<0.05),擬桿菌屬在多糖組腸道微生物群中占(10.31±1.5)%,而對(duì)照組為(5.4±1.38)%;羅氏菌屬在多糖組中占(0.17±0.07)%,而在對(duì)照組中未檢測(cè)到。
腸道微生物通過(guò)膳食纖維的發(fā)酵和短鏈脂肪酸(SCFAs)的產(chǎn)生來(lái)提高能量利用率,從而提高宿主代謝效率。本試驗(yàn)將小鼠糞便樣品按照冷凍干燥糞便樣品,準(zhǔn)確稱取50mg樣品,加入1.2mL磷酸鹽緩沖液(pH7.3)混勻,4℃14000r/min離心20min,吸取上清液至5mL離心管中。每200μL上清加入0.1mL的稀釋后硫酸(體積分?jǐn)?shù)50%),充分混勻3min,用2mL二氯甲烷(色譜級(jí))進(jìn)行萃取,4℃靜置2h,然后用0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾。采用氣相色譜(GC)檢測(cè)樣品中短鏈脂肪酸的含量,樣品提取方法參照Z(yǔ)hao等并做部分修改。GC分析采用常規(guī)HP-FFAP(25m×0.32mm,0.5μm)配置柱,程序設(shè)定參照賈益群等在生物樣品脂肪酸提取與分析的研究結(jié)果,并調(diào)整其分流比為20∶1。SCFA標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置以及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制參照孟拓等對(duì)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析腸道炎小鼠短鏈脂肪酸代謝研究結(jié)果。
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