(2)紫外光譜分析
卵形鯧鯵加工副產物明膠與市售明膠紫外光譜掃描結果見圖8。
紫外光譜分析顯示,市售明膠和卵形鯧鯵加工副產物明膠的最大吸收波長均在235nm處,與鯉魚骨明膠最大紫外吸收峰235nm和大鯢皮明膠最大吸收峰234nm基本一致,紫外吸收峰主要是由電子的N-π*和N-σ*幸躍遷所產生。此外,加工副產物明膠還有一個小的吸收峰(250~280nm處),這可能與明膠存在少量芳香族氨基酸有關。
(3)傅里葉紅外光譜分析
卵形鯧鯵加工副產物明膠與市售明膠傅里葉紅外光譜掃描結果見圖9。
酰胺A是由N-H伸縮振動或O-H伸縮振動產生的吸收峰,市售明膠及卵形鯧鯵加工副產物明膠酰胺A的吸峰值分別出現在3408.21cm-1處和3330.20cm-1處,但兩種明膠吸收峰都有變寬,這是由于當多肽中N-H基團參與形成氫鍵,酰胺A通常向低波數移動,且譜峰變寬;酰胺B是由=C-H和-NH+3的不對稱拉升引起,市售明膠和加工副產物明膠都在2933.72處出現吸收峰;酰胺I由C=O伸縮振動引起,其吸收峰一般出現在1600~1700cm-1處,由于不受肽鏈側基的影響,是研究明膠二級結構的最有效部分,市售明膠和加工副產物明膠酰胺I的吸收峰分別出現在1654.92和1652.99cm-1,但加工副產物明膠的吸收峰有向低波數移動,這是由于熱提過程中明膠分子的肽鏈結構得以伸展,導致螺旋度變少,整個蛋白的無序結構增加;酰胺Ⅱ、Ⅲ與N-H彎曲振動和C-N伸縮振動有關,其吸收峰分別在1549~1558cm-1、1200~1300cm-1范圍內,市售明膠和加工副產物明膠酰胺Ⅱ的吸收峰分別出現在1550.76和1541.12cm-1以及酰胺Ⅲ的吸收峰都出現在1240.22cm-1處。其中酰胺Ⅲ反映了膠原蛋白的三螺旋結構的完整性,由此可看出本法提取的明膠產品較好的保持了基本的三股螺旋結構。
(4)SDS-PAGE電泳分析
卵形鯧鯵加工副產物明膠與市售明膠SDS-PAGE電泳結果見圖10。
圖10的SDS-PAGE電泳圖譜顯示,市售明膠和卵形鯧鯵加工副產物明膠均有明顯的3條帶,α1鏈、α2鏈和一條β鏈,與標準蛋白Marker對照,市售明膠和加工副產物明膠的α1鏈分子量約為125kDa,α2鏈分子量約為119Da,β鏈分子量約為245kDa,這與吳瀟揚和廖偉等等明膠電泳分子量結果相似。由此顯示,本法較好的保持了明膠基本的三股螺旋結構。
(5)氨基酸組成分析
卵形鯧鯵加工副產物明膠氨基酸的組成測定結果見表5。
表5顯示,卵形鯧鯵加工副產物明膠中,氨基酸是甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和天冬氨酸含量較高,酪氨酸和甲硫氨酸的含量相對較少,而未能發(fā)現胱氨酸殘基。其中甘氨酸含量最高達到為5.452%±0.39%,甘氨酸是大多數明膠中的主要氨基酸,高于卵形鯧鯵魚肉中的甘氨酸1.79%±0.35%;此外,羥脯氨酸和脯氨酸是膠原蛋白的特征氨基酸,加工副產物明膠的脯氨酸含量相對較高,為2.864%±0.05%,而且這類氨基酸在其它蛋白質的氨基酸組成中很少出現,因此說明了酸堿處理之后有利于雜蛋白的除去。對于未能測定出的胱氨酸,可能是因為由于提取條件的問題而造成了這類氨基酸成分的損失,本產品含有7種必需氨基酸(色氨酸未測)。
三、結論
卵形鯧鯵加工副產物明膠提取最佳工藝條件為0.8%Na0H處理2h,水洗至中性后再使用0.4%HCl處理1h,最后在60℃下熱提6h,此工藝下明膠的得率達到45.41%。卵形鯧鯵加工副產物明膠的凝膠強度和黏度均屬于中等水平,滿足食用明膠的標準。紫外和紅外光譜分析顯示,具有明膠的特征吸收峰;SDS-PAGE電泳分析,該明膠具有三股螺旋結構;明膠產品的主要氨基酸為甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和天門冬氨酸,其中,明膠的主要組成氨基酸,甘氨酸含量最高(5.452%);膠原蛋白的特征氨基酸脯氨酸的含量相對較高(2.864%),表明卵形鯧鯵加工副產物中所提明膠品質較好,本研究可以為卵形鯧鯵加工副產物明膠的制備提供理論依據,為卵形鯧鯵一體化的深加工提供參考。
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