隨著中藥行業(yè)快速發(fā)展，中藥加工企業(yè)數(shù)量不斷增加，加工生產(chǎn)過程中產(chǎn)生大量中藥渣，傳統(tǒng)處理方法有焚燒、填埋、固定區(qū)域堆放等，處理藥渣不僅需要投入大量資金，也造成中藥資源大量浪費。

黃花蒿，別稱青蒿（Artemisia annua），是我國傳統(tǒng)中藥，主要用于消腫、止汗、涼血等。青蒿中除含有抗瘧成分青蒿素、青蒿酯鈉、蒿甲醚外，還含有青蒿酸、雙氫青蒿素、青蒿醇、青蒿乙素等功效成分。青蒿素等功效成分藥理作用的深入研究，促使相關(guān)青蒿原料制藥企業(yè)加大青蒿素等功效成分的提取，青蒿藥渣量逐漸增加，殘留功效成分和藥用價值得不到充分利用。因此積極探索青蒿葉渣新的應(yīng)用，增加青蒿產(chǎn)品種類及附加值，有助于提升青蒿葉渣資源利用率。

目前中藥渣處理方式有重新提取藥渣中有效成分、制成無公害化肥、作為食用菌栽培基質(zhì)及飼料添加j等。針對中藥渣難處理的問題，以污水處理廠厭氧污泥為接種物，發(fā)酵中藥渣產(chǎn)生沼氣，為中藥渣的綜合利用提供新思路。動物養(yǎng)殖方面，通過優(yōu)化菌種及配比方式，將中藥渣發(fā)酵生產(chǎn)功能性飼料，可以提高泌乳獺兔的生產(chǎn)性能及斷奶仔豬的免疫力。研究發(fā)現(xiàn)，中藥渣中含有豐富的粗脂肪、粗蛋白、多糖和多種微量
元素，是一種可循環(huán)的生物質(zhì)資源和天然培養(yǎng)基。微生物分泌纖維素酶、蛋白酶及多種微量元素，可破壞植物細胞壁，大幅度提升發(fā)酵產(chǎn)物中功效成分含量。

綜上所述，本研究采用固態(tài)發(fā)酵的方式，探索開發(fā)青蒿葉渣作為動物保健產(chǎn)品的可能性，為青蒿葉渣綜合處理提供新思路，具有廣闊的市場發(fā)展前景。

1 試驗材料

1. 1 試驗菌種

試驗菌株見表 1。 

1. 2 儀器

恒溫振蕩器 THZ-98A；紫外分光光度計 UV-5100B；GCMS-QP20（日本島津）；微量 XPE/微量分 析 天 平 ；漩 渦 震 蕩 器 Vortex-1；真 空 濃 縮 機CONCENTRATOR PLUS（德國艾本德公司）；潔凈 工 作 臺 SW-CJ-2FD；無 氧 發(fā) 酵 袋（28 cm×40cm）。

1. 3 試劑

氫氧化鈉、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、石油醚均購買自北京化工廠；青蒿乙素、雙氫青蒿酸標品購自成都埃法生物科技有限公司；青蒿葉渣由廣西仙草堂有限責(zé)任公司提供。 2 方法

2. 1 種子液制備

里氏木霉、地衣芽孢桿菌、黑曲霉菌、枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、瑞士乳桿菌、丁酸梭菌、植物乳桿菌 B7、酵母菌和畢赤酵母菌按接種量 2% 接種于 30 mL LB（1% 蛋白胨，0. 5% 酵母粉，1% 氯化鈉）培養(yǎng)基并連續(xù)活化 2 次，取第二次活化菌液，再次按接種量 2% 接種于 100 mL LB 培養(yǎng)基，酵母菌和畢赤酵母菌 30℃培養(yǎng) 24 h，其余菌株 37℃培養(yǎng) 24 h，丁酸梭菌種子液培養(yǎng)在厭氧發(fā)酵
瓶中進行。

2. 2 發(fā)酵

青蒿葉渣固體培養(yǎng)基成分：30 g 青蒿葉渣、5 g玉米漿、20 g 豆粕、3 g 紅糖、2 g 石粉，以上 5 種物質(zhì)
混合粉碎過 80 目篩，每組重復(fù) 3 次。單一菌株發(fā)酵：里氏木霉、地衣芽孢桿菌、黑曲霉菌、枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、瑞士乳桿菌、植物乳桿菌 B7、丁酸梭菌、酵母菌和畢赤酵母菌單一菌種種子液 40 mL 接種于固體培養(yǎng)基中，酵母菌和畢赤酵母菌 30℃發(fā)酵 7 d，其余菌株 37℃培養(yǎng) 7 d，丁酸梭菌在無氧發(fā)酵袋中發(fā)酵，每組重復(fù) 3 次。

優(yōu)選菌混合發(fā)酵：根據(jù)粗蛋白、雙氫青蒿酸和青蒿乙素試驗結(jié)果，選取枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌和酵母菌作為進一步試驗對象，各取 13 mL 種子液混合加入固體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 7 d，混合菌固態(tài)發(fā)酵，每組重復(fù) 3 次。 

2. 3 粗蛋白和功效成分測定方法

青蒿葉渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物處理采用余正文對青蒿的處理方法］；發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白含量測定采用雙縮脲法；發(fā)酵產(chǎn)物功效成分檢測使用 GC-MS測定，采用 Tian 的檢測方法。 

2. 4 飼喂實驗

選取日齡 132 天、4 800 羽的羅曼灰雞，平均分為 3 組，每組重復(fù) 3 次。對照組飼喂全價料，試驗組青蒿葉渣混合菌發(fā)酵產(chǎn)物按 5% 比例添加到全價料中飼喂雞群，15 d 后觀察并比較 2 組雞蛋色澤及糞便顏色，并進行篩糞處理。

2. 5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用 GraphPad Prism 7 軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用 x±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間進一步比較采用 LSD-test，P<0. 05 差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

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