2 試驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對RAW264.7細(xì)胞存活率的影響

有研究表明若樣品濃度超過細(xì)胞無毒性濃度范圍，則會對細(xì)胞造成毒害作用。通過測定不同質(zhì)量濃度的樣品對細(xì)胞存活率的影響，確定適合后續(xù)研究的樣品質(zhì)量濃度范圍。由圖1a可以得出，異綠原酸A質(zhì)量濃度在0.1～2mg/mL范圍對細(xì)胞存活率無顯著性影響；異綠原酸C質(zhì)量濃度在0.1～1mg/mL范圍對細(xì)胞存活率無顯著影響，然而當(dāng)樣品質(zhì)量濃度增到2mg/mL時，細(xì)胞存活率提高了27.80％：甜葉菊廢渣提取物質(zhì)量濃度在0.1～1mg/mL范圍對細(xì)胞存活率無顯著影響，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度達(dá)2mg/mL時，細(xì)胞存活率提高18.73％。這說明較高質(zhì)量濃度的異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物可促進(jìn)細(xì)胞的增殖。本試驗(yàn)樣品無毒質(zhì)量濃度范圍可選擇0.1～2mg/mL。

如圖lb所示，加入LPS誘導(dǎo)的RAW264.7炎癥細(xì)胞與正常細(xì)胞相比，存活率下降19.46％。當(dāng)異綠原酸C質(zhì)量濃度為1mg/mL時，對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的存活率有促進(jìn)作用，RAW264.7細(xì)胞存活率提高23.32％：當(dāng)異綠原酸A和異綠原酸C質(zhì)量濃度2mg/mL時，RAW264.7細(xì)胞存活率分別提高25.92％和43.22％。而甜葉菊廢渣提取物質(zhì)量濃度在0.1～2mg/mL范圍內(nèi)對RAW264.7細(xì)胞的存活率均無顯著性作用。綜上可以得出，3種樣品對RAW264.7細(xì)胞存活率的促進(jìn)效果為異綠原酸C＞異綠原酸A＞甜葉菊廢渣提取物。

2.2 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對炎癥細(xì)胞NO生成量的影響

檢測細(xì)胞N0生成量是抗炎活性研究中常用的手段之一。細(xì)胞在正常情況下生成少量N0，在炎癥狀態(tài)下大量產(chǎn)生N0，并釋放到細(xì)胞培養(yǎng)液中，通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中N0含量可以反映細(xì)胞炎癥狀態(tài)及樣品的抗炎效果。由圖2可知，RAW264.7細(xì)胞加入LPS誘導(dǎo)后N0釋放量顯著增至18.87LLmol/L，約為正常RAW264.7細(xì)胞N0生成量(5.73μmol/L)的3.3倍。當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為0.1mg/mL時，異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物對炎癥細(xì)胞N0生成量無顯著影響；質(zhì)量濃度在0.5～2.0mg/mL范圍的異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物對RAW264.7細(xì)胞N0生成量有明顯的抑制作用，且隨樣品質(zhì)量濃度的增加抑制效果增強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到2.0mg/mL時，與LPS組相比，異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物組中RAW264.7細(xì)胞N0的生成量分別減少43.60％，65.62％和57.59％。該結(jié)果表明，異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物均可抑制炎癥環(huán)境下NO的產(chǎn)生，進(jìn)而減輕炎癥，發(fā)揮抗炎作用，且在樣品質(zhì)量濃度為2.0mg/mL時甜葉菊廢渣提取物與異綠原酸C和異綠原酸A抗炎效果均無顯著性差異。由此推測，異綠原酸C的抗炎效果高于異綠原酸A，可能與二者分子結(jié)構(gòu)不同有關(guān)，同時甜葉菊廢渣提取物的抗炎作用也可能與甜葉菊廢渣提取物中其它黃酮類和酚酸類的物質(zhì)有關(guān)。zhao等研究顯示甜葉菊廢渣提取物中除含有異綠原酸外，還含有豐富的綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、槲皮苷和槲皮素。Gao等研究結(jié)果顯示綠原酸對脂多糖誘導(dǎo)的乳上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)有一定的保護(hù)作用。宋亞玲等研究金銀花中酚酸類成分及其抗炎活性，發(fā)現(xiàn)綠原酸、隱綠原酸和咖啡酸對LPS刺激的巨噬細(xì)胞炎癥因子均有不同程度的抑制作用。Hou等研究表明槲皮素對MC903誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎小鼠模型有很好的抗炎作用。袁雯雯等研究結(jié)果顯示不同濃度的咖啡酸對經(jīng)LPS刺激后的HUVECs細(xì)胞的存活率有一定的促進(jìn)作用。

2.3 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

角叉菜膠作為誘導(dǎo)劑的致炎模型，常用于抗炎藥物的藥效評價等領(lǐng)域，其根據(jù)注射后小鼠足部的腫脹度差異來分析樣品的抗炎效果。由表1可知，阿司匹林與地塞米松陽性對照組均對小鼠足趾腫脹度有顯著的抑制作用，其中地塞米松抑制效果最好，抑制率39.47％。在低劑量與中劑量組中，異綠原酸C對小鼠足趾腫脹均有明顯的抑制作用，異綠原酸A與甜葉菊廢渣提取物對其無顯著作用；在高劑量時，異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物均對小鼠足趾腫脹有明顯的抑制作用，抑制率分別為32.71％，34.65％和21.80％，抗炎效果排序依次為異綠原酸C＞異綠原酸A≈甜葉菊廢渣提取物。推測甜葉菊廢渣提取物中的抗炎成分可能是異綠原酸A和異綠原酸C。有研究表明，異綠原酸A和異綠原酸C可以抑制白細(xì)胞遷移和炎癥過程超氧陰離子的產(chǎn)生，具有良好的抗炎活性。異綠原酸C的抗炎效果比異綠原酸A的抗炎效果好，可能與二者的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異有關(guān)。

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