薇菜作為食用蔬菜已有悠久的歷史，過(guò)去在荒年是救荒草，現(xiàn)已步入高檔餐桌，其經(jīng)濟(jì)效益為一般蔬菜的4～5倍。野生薇菜鮮嫩味美，營(yíng)養(yǎng)豐富，未展開(kāi)的嫩葉尤為上品。薇菜既可鮮食，又可腌漬、干制，是向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐劑和甜味劑，由于日本的標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)苛，因此檢測(cè)出口食品中的食品添加劑含量達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于國(guó)內(nèi)食品添加劑含量的檢測(cè)也是一種保障。

我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法有很多，如滴定法、比色法、薄層色譜法、氣相色譜法等，但都是對(duì)樣品分別處理進(jìn)行不同方法的測(cè)定，沒(méi)有同時(shí)檢測(cè)的方法?，F(xiàn)在相對(duì)先進(jìn)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)都在研究這5種食品添加劑同時(shí)檢測(cè)的方法，針對(duì)于不同的基質(zhì)使用不同方法，目前按照檢測(cè)樣品的不同大致可以分為肉食品、飲品、乳制品、含油量高的基質(zhì)和普通基質(zhì)等檢測(cè)方法。在我國(guó)國(guó)標(biāo)中，最早出現(xiàn)對(duì)于食品添加劑檢測(cè)的是在2003年，那時(shí)的檢測(cè)針對(duì)于單獨(dú)的添加劑且方法相對(duì)落后。本法采用一種簡(jiǎn)單的前處理方法，使用的樣品為水煮薇菜，基質(zhì)簡(jiǎn)單易得，用高效液相色譜法對(duì)5種添加劑同時(shí)進(jìn)樣，一次檢測(cè)得到多種結(jié)果，大大節(jié)省了人力、物力和時(shí)間，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

一、材料與方法

1、材料與試劑

甲醇（色譜純）：FisherScientific公司；乙酸銨（分析純）、稱取1.54g乙酸銨加水溶解并稀釋至1000mL，靜置，過(guò)0.45μm孔徑濾膜，鹽酸（分析純）：量取100mL鹽酸，與100mL水充分混合，靜置）；氨水、乙醚（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水

2、儀器與設(shè)備

LX—130離心機(jī)（控溫）日本TOMY公司；UW402S電子天平，梅特勒一托利多有限公司；UMV一2多管渦旋混合器，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司；Agilent一1100高效液相色譜儀，安捷倫公司；50mL離心管、10mL移液管、移液槍、一次性吸管、pH試紙、0.5μm水性濾膜等。

3、樣品前處理

大多數(shù)樣品中存在許多大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，需要使用沉淀劑進(jìn)行凈化處理，如乙酸鋅、亞鐵氰化鉀等，但本樣品不含有上述大分子物質(zhì)，故無(wú)需進(jìn)行凈化操作。

本法為反提法，即將樣品中的食品添加劑先正提取到乙醚層中，后用水反提取至水層中，定量檢測(cè)水層中的食品添加劑。

將水煮薇菜經(jīng)破碎處理后，稱取2.0g樣品于50mL離心管中，加水10mL和0.5mL鹽酸（1+1）進(jìn)行酸化處理。加入乙醚8mL震蕩提取2次（共16mL），合并提取液。將提取液震蕩，離心（4000r／nlin，5min），棄掉下層水層，向提取液中準(zhǔn)確加入10.0mL水，加氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，震蕩離心（4000r／min，5min），取下層水層過(guò)0.45μm水性濾膜。

4、標(biāo)準(zhǔn)品配制

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純品溶液稀釋，配制成10mg／L濃度的儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液稀釋成0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10rng／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、色譜柱條件

WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.02mol／L乙酸銨一甲醇（100+5）緩沖溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為220mm，紫外檢測(cè)器，柱溫25℃，流速1mL／min，進(jìn)樣量10μL。

6、精確度測(cè)定

為保證試驗(yàn)精確度，取6份樣品分別編號(hào)1，2，3，4，5，6，各稱取2g于50mL離心管中，加入10mL水和0.5mL鹽酸（1+1）進(jìn)行酸化處理。分別加入8mL乙醚提取2次（共16mL），合并提取液經(jīng)震蕩離心（4000r／min）5min，棄去下層水層，準(zhǔn)確加入10.0mL水，用氨水調(diào)節(jié)pH為7～8，震蕩離心（4000r／rnjn，5min），取下層水層過(guò)0.45μm水性濾膜。

7、準(zhǔn)確度測(cè)定

為保證試驗(yàn)方法提取到的添加劑含量的有效性，人為地向樣品中添加定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)回收率判斷樣品的檢測(cè)結(jié)果是否有效。大量實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)回收率在85％～110％之間時(shí)，結(jié)果可靠。向樣品中加入1mg／L的混標(biāo)溶液，與樣品進(jìn)行相同的前處理步驟，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)儀器檢測(cè)。

二、結(jié)果與分析

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

對(duì)混標(biāo)稀釋后濃度為0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到回歸方程，見(jiàn)表1。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種添加劑的出峰圖見(jiàn)圖1，按照出峰的時(shí)間分別是安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉。

由表1可知，該混標(biāo)溶液出峰時(shí)間分散，在檢出限濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

由圖1可知，5種添加劑出峰時(shí)間間隔明顯，且峰不存在重合現(xiàn)象，即如果樣品中含有上述5種添加劑，譜圖中會(huì)在相應(yīng)位置出峰。

2、樣品測(cè)定

對(duì)水煮薇菜使用反提法檢測(cè)食品添加劑含量，其結(jié)果見(jiàn)表2，譜圖見(jiàn)圖2。

對(duì)比圖1和圖2可以看出，圖2中的譜圖沒(méi)有在相應(yīng)位置出峰，所以水煮薇菜樣品中不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種食品添加劑。

3、精確度試驗(yàn)

為保證樣品的精確度，分別對(duì)水煮薇菜進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
 

由表3可知，進(jìn)行6次平行試驗(yàn)均無(wú)檢出添加劑，可能的情況是含有添加劑，但含量低于檢出限導(dǎo)致未檢出；另一種情況是均不含添加劑，故無(wú)檢出。上述2種情況均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果判定為水煮薇菜不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉5種添加劑。

4、準(zhǔn)確度試驗(yàn)

為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確度，進(jìn)行回收試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3，結(jié)果見(jiàn)表4。

由圖3和表4可知，人為加入含有混標(biāo)的樣品檢測(cè)結(jié)果是含有添加劑的，且同一種方法回收得到的添加劑含量不同?；厥章士梢宰C明該方法得到的結(jié)果可信，因?yàn)樵谇疤幚磉^(guò)程中提取得到的添加劑會(huì)有一定程度的損失；當(dāng)回收率低于100％時(shí)證明提取不完全或者有損失；當(dāng)回收率高于100％時(shí)，說(shuō)明樣品中同時(shí)也含有該添加劑。本法的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，回收率在89％以上，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果可靠。

5、結(jié)果計(jì)算

樣品中山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉、安賽蜜、糖精鈉的含量按照下式計(jì)算：

式中：X為樣品中食品添加劑含量，mg／kg；A為進(jìn)樣體積中食品添加劑的含量，mg；V為試樣稀釋體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

三、討論

試驗(yàn)表明：對(duì)樣品進(jìn)行破碎、浸提后，使用WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.02mol／L乙酸銨一甲醇（100+5）緩沖溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為220mm，紫外檢測(cè)器，柱溫25℃，流速1mL／min，進(jìn)樣量10μL時(shí)，混標(biāo)中安賽蜜、糖精鈉、山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉的出峰時(shí)間分別為4.785，6.681，8.117，11.310，12.987min，樣品中未檢出。不同回收率表明在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，會(huì)有不明原因的損失，可能是提取時(shí)間不足，可能是提取試劑還有待改善，還有可能是檢測(cè)時(shí)間不及時(shí)，導(dǎo)致部分添加劑降解。在國(guó)標(biāo)中以水煮薇菜為例，使用反提法檢測(cè)5種食品添加劑，方法簡(jiǎn)便，可以節(jié)約大量人力、物力，節(jié)約成本和資源，加快工作效率。

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