1 前言

綠原酸類物質(zhì)廣泛存在于多種植物中，常見(jiàn)的來(lái)源有金銀花、咖啡豆、杜仲等。最近的研究表明，甜葉菊中綠原酸類成分總含量可達(dá)1.7%～7.2%，主要的綠原酸類物質(zhì)有綠原酸（3-CQA）、新綠原酸（5-CQA）、隱綠原酸（4-CQA），作為新的綠原酸類成分來(lái)源具有重要開發(fā)意義。然而綠原酸與異綠原酸分子中含有的鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，從植物提取過(guò)程中，受到高溫加熱、光照、pH變化易分解，造成提取率下降。

王冬萍等研究表明，異綠原酸A在酸性，低溫環(huán)境中較為穩(wěn)定，高溫、強(qiáng)堿、活波金屬離子及紫外光均可加速其降解。劉興勇等針對(duì)咖啡豆中的綠原酸類物質(zhì)在烘焙過(guò)程中的降解進(jìn)行研究，結(jié)果表明溫度和時(shí)間的交互作用均對(duì)咖啡豆綠原酸類成分含量產(chǎn)生極顯著影響。MoonJK等研究同樣表明，咖啡豆烘焙的方法導(dǎo)致豆類中的綠原酸濃度降低，因?yàn)樵诤姹哼^(guò)程中綠咖啡豆中存在的綠原酸類成分有相當(dāng)大比例被降解成揮發(fā)性成分。羅磊等的研究中，金銀花的綠原酸含量和L值隨干燥溫度、裝載量和氧體積分?jǐn)?shù)的升高而降低，證實(shí)了綠原酸遇熱易分解。邱喜龍等考察了綠原酸在水溶液中的穩(wěn)定性，結(jié)果表明綠原酸在酸性、低溫條件下較穩(wěn)定。綠原酸在一定條件下可以轉(zhuǎn)化為新綠原酸等綠原酸類衍生物，主要影響其轉(zhuǎn)化的因素包括：溫度、pH、時(shí)間等。

本研究以甜葉菊綠原酸為研究對(duì)象，考察了光照、溫度、提取溶劑、金屬離子、氧氣對(duì)甜葉菊綠原酸穩(wěn)定性的影響，為綠原酸類成分的提取、加工條件和產(chǎn)品的儲(chǔ)存、運(yùn)輸環(huán)境選擇具有一定的指導(dǎo)意義。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

材料：甜葉菊綠原酸產(chǎn)品，粉末（晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司）；甲醇，分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙醇，分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；鹽酸，分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；氫氧化鈉，分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；FeSO₄·7H₂O，分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；CuSO₄·5H₂O，分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

2.2 儀器與設(shè)備

人工氣候箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；真空包裝機(jī)（北京吉奧德包裝機(jī)械有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；pH計(jì)（上海三信儀表廠）；高效液相色譜儀e2695型（沃特世科技（上海）有限公司）；恒溫水浴鍋（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；電子分析天平，感量0.00001g（日本島津公司）。

2.3 色譜條件

試樣的前處理：原料需充分粉碎，保證40目篩通過(guò)率在95%以上，合并粉碎后樣品倒入混樣袋中，搖晃10min以上，充分混勻，稱取1g（精確至0.0001g）樣品至100mL容量瓶中，加入70%甲醇定容，超聲2h，冷卻至室溫后過(guò)0.45μm濾膜備用。

色譜條件：色譜柱：PhenomenexKinetex5μmC18100*4.6mm；檢測(cè)波長(zhǎng)：330nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：3μL；流速：1.5mL/min；流動(dòng)相A：0.1%三氟乙酸；流動(dòng)相B：乙腈；緩沖液：乙腈∶水∶甲酸=100∶880∶20。

梯度條件見(jiàn)表1。

2.4 實(shí)驗(yàn)方法

取甜葉菊綠原酸產(chǎn)品，用80%甲醇配制成20mg/mL的溶液，作為儲(chǔ)備液。

2.4.1 光照因素

取甜葉菊綠原酸產(chǎn)品，分為3組，均勻平鋪在透明袋中真空包裝，將3組樣品置于人工氣候箱中，溫度設(shè)定為25℃，光照強(qiáng)度分別設(shè)為0lx、3000lx、10000lx，放置20d后取樣檢測(cè)綠原酸產(chǎn)品中各組分含量變化情況。

2.4.2 溫度因素

取甜葉菊綠原酸產(chǎn)品于若干培養(yǎng)皿中，45℃、65℃、85℃、105℃下加熱，2h、6h、12h取樣檢測(cè)，并取25℃下綠原酸產(chǎn)品作為空白對(duì)照。

取儲(chǔ)備液于若干磨口錐形瓶中，稱重。分別置55℃、65℃、75℃、85℃下水浴回流加熱，隔2h、6h、12h取出，待錐形瓶冷卻至室溫后稱重，用80%甲醇溶液補(bǔ)至加熱前的重量，混勻后取樣檢測(cè)。

2.4.3 氧氣因素

分別精密量取100mL儲(chǔ)備液于4個(gè)磨口錐形瓶中，稱重。在25℃下，1～2號(hào)瓶通入氧氣，3～4號(hào)瓶通入氮?dú)猓?、3號(hào)瓶在24h稱重補(bǔ)重后取樣檢測(cè)，2、4號(hào)瓶在48h稱重補(bǔ)重后取樣檢測(cè)。

2.4.4 pH因素

取綠原酸產(chǎn)品，用水配制成20mg/mL的溶液，分別精密量取100mL溶液于若干個(gè)錐形瓶中，錐形瓶分為兩組，一組調(diào)節(jié)pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后稱重，取樣檢測(cè)；另一組調(diào)節(jié)pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后稱重，25℃放置4h，取樣檢測(cè)。

2.4.5 金屬離子因素

取甜葉菊綠原酸產(chǎn)品，用80%甲醇配制成16.67mg/mL的溶液，取樣作為空白對(duì)照。精密量取100mL溶液于若干個(gè)錐形瓶中，錐形瓶分為兩組，一組加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LCuSO4溶液；另一組加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LFeSO4溶液。兩組溶液分別于0、4h取樣檢測(cè)。

3 結(jié)果與討論

下文中試驗(yàn)數(shù)據(jù)均為單一測(cè)量值。

3.1 光照因素

甜葉菊綠原酸產(chǎn)品在0lx光照強(qiáng)度下總酸含量為24.67%，5-CQA含量為14.59%，含量無(wú)損失；3000lx光照下總酸含量減少1.3%，5-CQA含量減少0.31%；10000lx光照強(qiáng)度下總酸含量減少2.9%，5-CQA含量減少1.1%。數(shù)據(jù)表明光照強(qiáng)度越高，綠原酸類成分含量減少的幅度越大。

相關(guān)鏈接：綠原酸，氫氧化鈉，鹽酸，乙腈

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