(二)分光光度法

1、原理

樣品通過(guò)水蒸氣蒸餾，使BHT分離，用甲醇吸收，遇鄰聯(lián)二茴香胺與亞硝酸鈉溶液生成橙紅色，用三氯甲烷提取，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

2、試劑

①無(wú)水氯化鈣。

②甲醇。

③三氯甲烷。

④亞硝酸鈉溶液：3g/L，避光保存。

⑤聯(lián)鄰二茴香胺溶液：稱(chēng)取125mg鄰聯(lián)二茴香胺于50mL棕色容量瓶中，加25mL甲醇，振搖使全部溶解，加50mg活性炭，振搖5min，取20mL濾液，置于另一50mL棕色容量瓶中，加鹽酸(1+11)至刻度。臨用時(shí)現(xiàn)配并避光保存。

⑥BHT標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.050gBHT，用少量甲醇溶解，移入lOOmL棕色容量瓶中，并稀釋至刻度，避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于0.50mgBHT。

⑦BHT標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)吸取1.0mL的BHT標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇至刻度，混勻，避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于10.0μgBHT。

3、儀器

水蒸氣蒸餾裝置；甘油??；分光光度計(jì)。

4、操作方法

(1)樣品處理：稱(chēng)取2～5g樣品(約含0.40mgBHT)于100mL蒸餾瓶中，加16g無(wú)水氯化鈣粉末及10mL水，當(dāng)甘油浴溫度達(dá)到165℃恒溫時(shí)，將蒸餾瓶浸入甘油浴中，連接好水蒸氣發(fā)生裝置及冷凝管，冷凝管下端浸入盛有50mL甲醇的200mL容量瓶中，進(jìn)行蒸餾，蒸餾速度每分鐘1.5～2mL，在50～60min內(nèi)收集約lOOmL餾出液(連同原盛有的甲醇共約150mL，蒸氣壓不可太高，以免油滴帶出)，以溫?zé)岬募状挤执蜗礈炖淠?，洗液并入容量瓶中并稀釋至刻度?/p>

(2)測(cè)定：準(zhǔn)確吸取25mL上述處理后的樣品溶液，移入用黑紙(布)包扎的lOOmL分液漏斗中，另準(zhǔn)確吸取0.OmL，1.0mL，2.OmL，3.OmL，4.0mL，5.OmL BHT標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于Oμg，10μg，20μg，30μg，40μg，50μgBHT)，分別置于黑紙(布)包扎的60mL分液漏斗，加入甲醇(50％)至25mL。分別加入5mL鄰聯(lián)二茴香胺溶液，混勻，再各加2mL亞硝酸鈉溶液(3g/L)，振搖1min，放置10min，再各加lOmL三氯甲烷，劇烈振搖lmin靜置3min后，將三氯甲烷層分入黑紙(布)包扎的10mL比色管中，管中預(yù)先放入2mL甲醇，混勻。用lcm比色杯，以三氯甲烷調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)520nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。

參考資料：食品中有毒有害物質(zhì)檢測(cè)

相關(guān)鏈接：抗氧化劑，甲醇，亞硝酸鈉，三氯甲烷